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5小時(shí)搞定AAV空殼/實(shí)心分離!「OptiMATE梯度大師」放大攻略來了!

AAV基因療法火不火,關(guān)鍵就看「實(shí)心衣殼」純不純。CsCl密度梯度超離(DGUC)仍是金標(biāo)準(zhǔn),但16-20 h的離心時(shí)間讓人頭大。貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)推出OptiMATE「預(yù)制梯度」方案,把4×39 mL(Type 70Ti)跑樣時(shí)間壓到5小時(shí)。
今天我們把同樣的速度搬進(jìn)了更大容量轉(zhuǎn)子
Type 50.2Ti(468 mL)
和Type 45Ti(564 mL)
放大不翻車!
實(shí)驗(yàn)一:預(yù)制梯度vs自形成梯度
OptiMATE自動(dòng)分液灌裝線性CsCl梯度(1.15-1.55 g/mL)→離心4 h;
手工灌均一液(1.35 g/mL)→20 h自形成梯度。
實(shí)驗(yàn)二:AAV樣本加載
39 mL管:2×1013 vg AAV9;
94 mL管:4×101? vg AAV9。
離心參數(shù):

實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比:
梯度曲線幾乎重疊,預(yù)形成4 h=自形成20 h分辨率。
AAV純化條帶實(shí)拍:AAV空殼/實(shí)心條帶銳利,5 h即可手動(dòng)側(cè)抽回收(圖2)
分析型超離驗(yàn)證實(shí)心AAV純度≈90%,時(shí)間節(jié)省75%
通過「預(yù)形成梯度+大容量轉(zhuǎn)子」把AAV空殼純化從2天壓到半天,放大不掉分辨率,OptiMATE梯度大師為基因治療CMC提速!
Type 45Ti:一次8×94 mL=752 mL,比傳統(tǒng)70Ti多出80%通量;
Type 50.2Ti:12×39 mL=468 mL,管數(shù)多50%,抽提步驟更少;
全程封閉灌梯度→減少人為誤差,GMP場(chǎng)景友好。


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